ELISA කට්ටලය පදනම් වන්නේ ප්රතිදේහජනක හෝ ප්රතිදේහවල ඝන අවධිය සහ ප්රතිදේහජනක හෝ ප්රතිදේහ එන්සයිම ලේබල් කිරීම මතය. ඝන වාහකයේ මතුපිටට බැඳී ඇති ප්රතිදේහජනක හෝ ප්රතිදේහ තවමත් එහි ප්රතිශක්තිකරණ ක්රියාකාරකම් රඳවා තබා ගන්නා අතර, ප්රතිදේහජනක හෝ ප්රතිදේහ ලේබල් කරන ලද එන්සයිම එහි ප්රතිශක්තිකරණ ක්රියාකාරකම් සහ එන්සයිම ක්රියාකාරිත්වය යන දෙකම රඳවා ගනී. නිර්ණය කරන අවස්ථාවේදී, පරීක්ෂණයට ලක්වන නියැදිය (ප්රතිදේහ හෝ ප්රතිදේහජනක මනිනු ලබන) ඝන වාහකයේ මතුපිට ඇති ප්රතිදේහජනක හෝ ප්රතිදේහ සමඟ ප්රතික්රියා කරයි. ඝන වාහකය මත පිහිටුවා ඇති ප්රතිදේහ-ප්රතිදේහ සංකීර්ණය සේදීම මගින් දියරයේ අනෙකුත් ද්රව්ය වලින් වෙන් කරනු ලැබේ.
එන්සයිම-ලේබල් කරන ලද ප්රතිදේහජනක හෝ ප්රතිදේහ එකතු කරනු ලබන අතර, එය ප්රතික්රියාව මගින් ඝන වාහකය වෙත බන්ධනය වේ. මෙම අවස්ථාවේදී, ඝන අවධියේ එන්සයිම ප්රමාණය නිදර්ශකයේ ද්රව්ය ප්රමාණයට සමානුපාතික වේ. එන්සයිම ප්රතික්රියාවේ උපස්ථරය එකතු කිරීමෙන් පසුව, උපස්ථරය වර්ණ නිෂ්පාදන බවට පත් කිරීම සඳහා එන්සයිම මගින් උත්ප්රේරණය කරනු ලැබේ. නිෂ්පාදනයේ ප්රමාණය නිදර්ශකයේ පරීක්ෂා කරන ලද ද්රව්යයේ ප්රමාණයට කෙලින්ම සම්බන්ධ වේ, එබැවින් වර්ණ ගැඹුර අනුව ගුණාත්මක හෝ ප්රමාණාත්මක විශ්ලේෂණයක් සිදු කළ හැකිය.
එන්සයිමවල ඉහළ උත්ප්රේරක කාර්යක්ෂමතාව වක්රව ප්රතිශක්තිකරණ ප්රතිචාරයේ ප්රතිඵල වර්ධනය කරයි, විශ්ලේෂණය ඉතා සංවේදී කරයි. ප්රතිදේහ නිර්ණය කිරීමට ELISA භාවිතා කළ හැකි නමුත් ප්රතිදේහ නිර්ණය කිරීමට ද භාවිතා කළ හැක.
ELISA කට්ටලයේ මූලික මූලධර්ම
එය වස්තුව එන්සයිමයට සම්බන්ධ කිරීම සඳහා ප්රතිදේහජනක සහ ප්රතිදේහ නිශ්චිත ප්රතික්රියාවක් භාවිතා කරයි, පසුව ප්රමාණාත්මක නිර්ණය සඳහා එන්සයිම සහ උපස්ථරය අතර වර්ණ ප්රතික්රියාවක් නිපදවයි. මිනුම් වස්තුව ප්රතිදේහ හෝ ප්රතිදේහජනක විය හැක.
මෙම නිර්ණය කිරීමේ ක්රමයේදී අවශ්ය ප්රතික්රියාකාරක තුනක් ඇත:
â ඝන අදියර ප්රතිදේහජනක හෝ ප්රතිදේහ (ප්රතිශක්තිකරණ adsorbent)
â¡ එන්සයිම ලේබල් කරන ලද ප්රතිදේහජනක හෝ ප්රතිදේහ (සලකුණු)
⢠එන්සයිම ක්රියාව සඳහා උපස්ථරය (වර්ණ සංවර්ධන නියෝජිතයා)
මැනීමේදී, ප්රතිදේහජනක (ප්රතිදේහ) ප්රථමයෙන් ඝන වාහකයාට බැඳී ඇත, නමුත් තවමත් එහි ප්රතිශක්තිකරණ ක්රියාකාරකම් රඳවා තබා ගනී, පසුව ප්රතිදේහ (ප්රතිදේහජනක) සහ එන්සයිමවල සංයෝජන (සලකුණු) එකතු කරනු ලැබේ, එය තවමත් එහි මුල් ප්රතිශක්තිකරණ ක්රියාකාරකම් සහ එන්සයිමය රඳවා තබා ගනී. ක්රියාකාරිත්වය. ඝන වාහකයේ ඇති ප්රතිදේහජනක (ප්රතිදේහ) සමඟ සංඝටකය ප්රතික්රියා කරන විට, එන්සයිමයේ අනුරූප උපස්ථරය එකතු වේ. එනම්, උත්ප්රේරක ජලවිච්ඡේදනය හෝ REDOX ප්රතික්රියාව සහ වර්ණය.
එය නිපදවන වර්ණ සෙවන මැනිය යුතු ප්රතිදේහජනක (ප්රතිදේහ) ප්රමාණයට සමානුපාතික වේ. මෙම වර්ණිත නිෂ්පාදනය පියවි ඇසින්, දෘශ්ය අන්වීක්ෂයෙන්, ඉලෙක්ට්රෝන අන්වීක්ෂයෙන් නිරීක්ෂණය කළ හැකි අතර, වර්ණාවලීක්ෂ දර්ශක (එන්සයිම ලේබල් උපකරණය) මගින්ද මැනිය හැක. ක්රමය සරල, පහසු, වේගවත් සහ විශේෂිත වේ.